一、 儀器介紹

實（shí）驗目（mù）的：

確定重複接觸受試物對哺乳（rǔ）動物是否可引起皮膚變態反應及其程度

試驗概述：  

局部封閉塗皮（pí）試驗（Buehler test，BT）和豚鼠最大（dà）值試驗（yàn）（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗（yàn）動物通（tōng）過多次皮膚（fū）塗抹（誘（yòu）導接觸）或皮內注射（shè）受試物10d~14d（誘導階段）後,給予激發劑量的受試物,觀察實（shí）驗動物,並與對照動物比較對激（jī）發接觸受試物的皮膚反（fǎn）應強度。

小（xiǎo）鼠局部淋巴結分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予實驗動物受試物,引起淋巴結（jié）的淋巴細胞增生,淋巴細胞增生與受試物劑量（過（guò）敏（mǐn）程度）成比例（lì）。利用放射性標記方法,測定試驗組與對照組淋巴細胞的標記率,並進行對比,獲得（dé）刺（cì）激指數,評價致敏強度。

應用範圍

應用於科研、農業、衛（wèi）生、教育、霧霾狀（zhuàng）態（tài）可吸入顆（kē）粒染毒效果（guǒ）研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥登記毒理學試驗方法（fǎ）第9部分皮膚變態反應（致敏）試驗》

二、試驗步驟（zhòu）:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠（shǔ）

操作步驟:

誘導階段:通過封閉式皮膚塗抹受試物，持續10-14天。激發階段:間隔後再次塗抹受試物，觀察皮膚反（fǎn）應。

觀察指標:紅斑、水腫等皮膚炎症反應的（de）強（qiáng）度（dù）(主觀（guān）評（píng）分)

優點:

模擬（nǐ）人類皮膚接觸途徑，適用於局部製劑（jì）(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操作（zuò）相對溫和。0

缺點:

敏感（gǎn）性（xìng）較低，可能漏檢弱致敏物，。依賴主（zhǔ）觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統化妝品、外用藥品的安全性評估。

2.豚鼠最大值試驗（GPMT）

動（dòng）物模型:豚鼠

操作步驟:

誘導階段（duàn）:皮內（nèi）注射受試物（常聯合弗氏（shì）完全佐劑）結合（hé）皮膚塗抹，持續10-14天。

激發（fā）階段:再次塗抹受試物，評估皮膚反應（yīng）。

觀察指標:與BT類似，但反應更強烈(紅斑、水（shuǐ）腫（zhǒng）、硬結（jié）)

優點:

敏感性高，可檢測強致（zhì）敏物和弱致敏物;

國際公認的“金標準”，尤其適用於化學品和工業原料。

缺點:

使用佐劑可能（néng）引（yǐn）發過度免疫反應（yīng），導致假陽性;

動物（wù）痛苦（kǔ）程度較高，倫（lún）理爭議較大。

應用場景:工業化（huà）學品、強致敏性物質(如染發劑、橡膠添加劑)的嚴格檢測。

3.小鼠局（jú）部淋巴結試驗（LLNA）

動物模型（xíng）:小鼠.

操作步驟:

誘導階段:連續3天耳部塗（tú）抹受試物（wù）。

檢（jiǎn）測指（zhǐ）標:通過3H-胸苷或BrdU標記增殖的淋巴細胞，計算刺激指數（SI）觀察指標:淋巴結淋巴細胞增殖程度（SI>3判為（wéi）陽（yáng）性）

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤（wù）差；

符合3R原則:動物用量少，無需激發階段，痛苦小;

高效（xiào）快速:試驗周期短(約1周)。

缺點:

對某些物質(如金屬鹽)敏感性不足，需使用放射性物質或特殊設備，成本較高。

應用場景:歐盟等法規優先推薦的替代方法，廣（guǎng）泛用於（yú）藥品、化妝品及化工產品的（de）初（chū）篩。