一、 仪器介绍

实验目的：

本试验检测（cè）受试物是否（fǒu）引起培养的哺乳动物细胞染色体畸变,以评价（jià）受试物（wù）致突变的（de）可能性

实验概述（shù）：

在加入和不加入代谢活化（huà）系（xì）统的条件下（xià）,使培（péi）养的哺（bǔ）乳动物细胞暴露于受试物中。用中期分裂相阻断剂（如秋水仙素（sù）或秋水仙（xiān）胺）处理,使细胞停止在中（zhōng）期分裂（liè）相（xiàng）,随后收（shōu）获细胞,制片（piàn）,染色,分析染色体畸变（biàn）。

大（dà）部分的致突变剂导致染色（sè）单体型畸变,偶有染色体型畸变发生。虽（suī）然多倍（bèi）体（tǐ）的增加可能预（yù）示着有染色体数（shù）目畸变的（de）可能,但本方法并不适合用（yòng）于测定（dìng）染色体的数目畸变。

应用范围

应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可（kě）吸入颗粒染（rǎn）毒效果研究等各个领域

符合标准：

GB/T 15670.19-2017《农药登记毒理学试验方法第19部（bù）分（fèn）:体外哺乳动物细胞染色体

畸变（biàn）试验》

二、试验流程

1）细胞培养

选择合适细胞系，在含血清培养（yǎng）基中培养至对数生长期。

2）受试物处（chù）理

设置多个浓度（dù）组（需包括细胞毒性评估，如50%生长抑制（zhì）浓度）

阳性对照（如丝裂霉素C、环磷酰胺等已知诱变剂（jì））

阴性对照（溶剂（jì）对照）

3.）代谢活化系统（S9混合液）

模拟体内代谢，用于检测需代谢激活的致突变物（wù）（如加Aroclor 1254诱导（dǎo）的大鼠肝S9）

4.）采样时间（jiān）

短期处理:1个细胞周期（通常24小时，含或（huò）不含S9）

长期处（chù）理（lǐ）:覆盖多个细胞周期（如48小时）

5）染色体制备

秋水仙素（或秋水仙胺）处理:阻断中期细胞。

低渗处理（KCI溶液）使细胞膨胀。

固定（甲醇:冰（bīng）醋酸=3:1）后滴片（piàn），Giemsa染色。

6）镜检分析

显微镜下观察至少200个中期分裂相（xiàng），记（jì）录畸变类型和频（pín）率。

三、仪器（qì）与试剂

关键仪器：

培养箱、生物安全柜、离心机（jī）、显微镜（配备油镜和图像分析系统）

染色体自动（dòng）扫描仪（可选）

主要试剂:

细胞培（péi）养基、胎牛血清、胰蛋白酶。

秋（qiū）水仙素、Giemsa染液、S9混合液。