一、 儀器介紹（shào）

實驗（yàn）目的：

本試驗檢測受試物是否引起培養的哺（bǔ）乳動（dòng）物細胞染色體畸變,以（yǐ）評價受試物（wù）致突（tū）變的可（kě）能性

實（shí）驗概述：

在加入和不加（jiā）入代謝活化係統的條（tiáo）件下,使培養的哺乳動物（wù）細胞暴露於受試物中。用中期分（fèn）裂相（xiàng）阻斷劑如秋水仙素或秋水仙胺處理,使細胞停止在中期分裂相,隨後收獲細胞,製（zhì）片,染色,分析染色體畸變。

大部分的致突變劑導致（zhì）染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發生。雖然多倍體的增加可能（néng）預示著有染（rǎn）色體數目畸變的可（kě）能,但本方法並不適合用於測定染色體的數（shù）目畸變。

應用範圍

應用（yòng）於科研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域（yù）

符（fú）合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒（dú）理學試驗方法第19部分:體外哺乳動物細胞染色體

畸變（biàn）試驗》

二、試（shì）驗流程

1細胞培養

選擇合適細胞係，在含血清培養基中培養至對數生（shēng）長期。

2受試物處理

設置多（duō）個濃（nóng）度組需包括細胞毒性評估，如50%生長抑製濃度

陽（yáng）性對照如絲裂黴素C、環磷酰胺等已（yǐ）知誘變劑

陰性對照溶（róng）劑對照（zhào）

3.代謝（xiè）活化係統S9混合液

模擬（nǐ）體內代謝，用（yòng）於檢測需代謝激活的致突變（biàn）物如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9

4.采樣時間

短期處理:1個細胞周期通常（cháng）24小時，含或不（bú）含S9

長期處理:覆蓋多個細胞周期如48小時

5染色體（tǐ）製備

秋水仙素或秋水仙胺處理:阻斷中期細胞。

低滲處理KCI溶液使細胞膨（péng）脹。

固定甲（jiǎ）醇:冰醋酸=3:1後滴片，Giemsa染色。

6鏡檢分析

顯微鏡下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、儀器（qì）與試（shì）劑

關鍵儀（yí）器：

培（péi）養箱、生物安全櫃、離心機、顯微（wēi）鏡配備油鏡和圖像分析係統

染色體自動掃描儀可選

主要試劑:

細胞培養基、胎牛血清（qīng）、胰（yí）蛋白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液（yè）。