一、 儀器介紹

實驗目的：

本試驗用於檢測受試物（wù）對（duì）體（tǐ）外（wài）培養的哺乳動（dòng）物細胞的基（jī）因突變作用（yòng）,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價（jià）受試物引起（qǐ）突變（biàn）的可能性

實（shí）驗概述：

本試驗屬（shǔ）正向突（tū）變試驗,可（kě）檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突（tū）變物。在加入和不（bú）加入代謝活化（huà）係統的條件下,使細（xì）胞暴（bào）露於受試物一定時間,然後將（jiāng）細（xì）胞傳代培養。胸苷激酶水（shuǐ）平正常的細胞對三氟胸苷trifluorothymidine,TFT等敏感,因（yīn）而在培養液中不能生長分（fèn）裂,突變細胞則（zé）不敏感,在含有三氟胸苷的選擇（zé）性培養液中（zhōng）能繼續分裂並形成集落。相似的,次（cì）黃嘌呤鳥嘌呤（lìng）磷酸核糖基酶(HPRT)正常的細（xì）胞（bāo）對（duì） 6-硫代鳥嘌呤6-thioguanine,6-TG敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代（dài）鳥嘌呤的選擇性培養液中可生長形成集落。基於突變集落數,計算突變頻率以評價受試（shì）物（wù）的致突變性（xìng）。

應用範圍

應用於科（kē）研、農（nóng）業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒（dú）效果研究等各（gè）個領域

符（fú）合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理學試驗方法第20部分（fèn）:體外哺乳（rǔ）動物細胞基（jī）因突變試驗》

二、試驗流程

1細胞培養:

選擇合適細胞係如L5178Y、CHO，常規傳代培養

2受試物處理:

暴露於不（bú）同濃度受試物需設陰性/陽性對照

3表達期:

預留足夠時間通常7-10天使突（tū）變表型顯現。

4.突變體篩（shāi）選:

TK試驗:使用三氟（fú）胸苷TFT篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代鳥嘌呤（lìng）6-TG選HPRT突變體。

5克隆形成（chéng）分析:

計數（shù）突變集落，計算突變頻率突（tū）變集落數/存活細胞數

6數據統計:

與對照組比較（jiào），判（pàn）斷突變率是否顯著增加（jiā）。

三、注意事項

1細胞（bāo）活力控製:受（shòu）試物濃度需保證細胞存活率通（tōng）常>50%

2代謝活（huó）化係統:需加入S9混合物(模擬（nǐ）體內（nèi）代謝，如Aroclor 1254誘導的大鼠（shǔ）肝S9。

3假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素幹擾。

4合規性:   遵循國際指南如OECD 490、ICH S2R1。

計算：